药物分析第五章ppt下载

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概述 第一节常用体内样品的制备与储存 一、体内样品的种类 二、体内样品的采集与制备 三、体内样品的储存与处理 第二节体内样品处理 一、体内样品处理的目的 二、常用体内样品处理方法 （一）去除蛋白质法 （二）分离与浓集法 1. 液相萃取法 （1）溶剂的选取原则 （2）溶剂的用量 2. 固相萃取法 （1）固相萃取法的原理 （2）固相萃取法操作步骤 （3）注意事项 （4）固相萃取法的特点 （5）自动化固相萃取法 柱切换： 固相萃取-LC/MS/MS 3. 超滤法 （三）缀合物水解法 （四）化学衍生化法 第三节体内样品分析方法与方法验证 一、分析方法的建立 （一）分析方法的选择 （二）分析方法建立的一般程序 二、分析方法的验证 （一）选择性 （二）标准曲线与定量范围 （三）定量下限 （四）精密度与准确度 （五）稳定性 （六）提取回收率 （七）基质效应 （八）试验样品分析 （九）试验样品浓度超出定量范围的处理 （十）作为外源性药物使用的内源性物质的测定 （十一）微生物学/免疫学方法的验证 （十二）名词解释1 （十三）名词解释2 （十四）名词解释3 第四节典型体内药物分析应用 氨氯地平 新型二氢吡啶类长效钙通道阻滞药，临床上主要用于治疗高血压和心绞痛 氨氯地平分子结构中含有一个手性碳原子，故具有一对光学异构体R-（+）-氨氯地平与S-（-）-氨氯地平 仅S-（-）-氨氯地平具有血管扩张作用 因此需进行血浆中氨氯地平对映体的手性分离与立体选择性药动学研究 色谱条件 色谱柱Chiralcel OJ RH柱（150mm × 4.6mm， 3.5μm）；流动相乙腈-0.2%氨的水溶液 （80︰20，v/v）；流速1.0ml/min；进样10µl 质谱条件 离子化方式，电喷雾（ESI）离子源；电离模式，正离子；扫描方式，多反应监测（MRM）。氨氯地平和氨氯地平-d4（内标物）的母/子离子对的质荷比（m/z）分别为409.2→238.1和413.2→238.1 方法学验证 选择性：在实验条件下两对映体色谱峰达基线分离，内源性物质不干扰测定 药物动力学结果 采用非房室模型方法计算获得药物动力学参数 R-/S-氨氯地平Cmax分别为（2.72±1.16）和（3.82±1.38）ng/ml Tmax分别为（8.70±1.64）和（9.70±2.21）小时 AUC0-t分别为（107±48.8）和（169±59.7）ng · h/ml t1/2分别为（39.9±7.23）和（52.8±13.6）小时 二、替诺福韦双特戊酯的体内药动学及其对左卡尼汀血药浓度的影响 替诺福韦（tenofovir） 开环核苷磷酸类化合物 新型核苷酸类逆转录酶抑制剂，具有抗HIV-1和乙肝病毒活性，但其生物利用度较低 富马酸替诺福韦二吡呋酯 替诺福韦的前药，生物利用度相对较高，已于2001年在美国批准上市 富马酸替诺福韦双特戊酯（tenofovir dipivoxil fumarate） 结构修饰物，具有我国自主知识产权 该药已获CFDA颁发的药物临床试验批件。Ⅰ期临床试验中，评价人体对于该药的耐受程度和药代动力学，为制订给药方案提供依据 试验设计与给药方法 受试者禁食12小时后，早晨空腹给药，用250ml温开水吞服富马酸替诺福韦双特戊酯片150、300和600mg 受试者口服药物前和服药后10、20、30、45分钟，1、1.5、2、3、5、8、12、24、36、48、72小时后各抽取血样5ml，然后立即离心获得血浆样品（试验样品），并将血浆样品于-20℃保存 色谱与质谱条件 色谱柱采用Inertsil ODS-3 （150mm × 4.6mm， 5μm），甲醇（A）-0.2%冰醋酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱，0分钟 （5%A）-0.8分钟 （5%A）-1分钟 （95%A）-4分钟 （95%A）-4.1分钟 （5%A）-5.5分钟 （5%A）；流速1.0ml/min。ESI正离子模式，MRM检测；毛细管电压 3.5kV；温度350℃；脱溶剂气600L/Hr；裂解电压，替诺福韦（130V），恩替卡韦（120V）；碰撞能量，替诺福韦（23eV），恩替卡韦（17eV）；样品检测：替诺福韦母离子 m/z288.1，子离子m/z176.0；内标检测：恩替卡韦母离子m/z278.1，子离子m/z152.0 方法学验证 选择性：替诺福韦的保留时间约为3.50分钟，内标恩替卡韦的保留时间约为3.50分钟，空白血浆样品在分析物保留时间无干扰 定量范围：替诺福韦在2～1200ng/ml范围内，线性关系良好（r=0.9984） 定量下限：为2ng/ml 提取回收率：内标和不同浓度质控样品回收率均大于50% 准确度和精密度：准确度在92%～108%之间，各项精密度实验结果RSD均小于5% 药物动力学结果 药物动力学参数经非房室模型计算。受试者口服低、中、高三个剂量富马酸替诺福韦双特戊酯片后，随着剂量的增加，Cmax和AUC成比例增加（r﹥0.99）。 在口服富马酸替诺福韦双特戊酯150～160mg剂量范围内，替诺福韦在人体内呈现线性药物动力学特征。 左卡尼汀 哺乳动物能量代谢中必需的体内天然物质，能够促进脂类代谢 体内缺乏可能引起脂肪代谢紊乱、骨骼肌和心肌等组织的功能障碍 长期服用福韦酯（dipivoxil）类化合物（如阿德福韦酯、替诺福韦双特戊酯等），可能加速左卡尼汀在人体内的消除，导致左卡尼汀在人体内缺乏 为联合应用替诺福韦双特戊酯和左卡尼汀，有必要对人体内左卡尼汀血药浓度进行监测 试验设计与给药方法 低剂量、中剂量和高剂量分别单次口服富马酸替诺福韦双特戊酯片150、300和600mg。受试者口服药物前和服药后8、15、30、45分钟，1、1.5、2、3、5、8、12、24、36、48、72小时后抽取血样4ml，3000 ×g离心10分钟，血浆于-80℃保存。中剂量300mg，连续给药14天，每日一次。在第14天给药后，按照单次给药试验抽取4ml血样、离心和保存 色谱条件 色谱分离采用DIKMA Spursil C18-EP柱 （150mm × 4.6mm， 5μm），柱温40℃，0.1%甲酸的乙腈溶液-10mol/L醋酸铵（70︰30，v/v）溶液流动相，流速0.7ml/min 血浆样品处理 40μl内标工作溶液（托特罗定 50μg/ml）加到0.2ml血浆中，涡旋，加0.4ml乙腈，涡旋，高速离心10分钟，取10μl上清液，加5ml流动相稀释，进样分析。左卡尼汀保留时间为5.3分钟 左卡尼汀单次给药150、300和600mg后，左卡尼汀的血药浓度与正常水平相比分别降低27%、48%和60%dIJ红软基地

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