酶活力的测定ppt下载

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4.6酶的活力测定及分离提纯 酶活力的测定 酶活力的测定 1.酶活力与酶反应速度 2.酶的活力单位（U） 3.酶的比活力 4.酶的催化常数 酶活力也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。 1.酶活力与酶反应速度 在一定条件下酶催化的化学反应速度可以反映酶活力。 酶促反应速度愈大，酶的活力就越强，反之速度愈小，酶的活力就愈低。所以测定酶的活力（即含量），就是测定酶促反应的速度。 酶反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少或产物的增加来表示。 因此当酶与底物混合开始反应后，于不同时间从反应混合物中取出一定量样品，停止酶的作用，分析样品中底物或产物的量，即可计算反应速度或酶的活力。 测定产物增加量或底物减少量的方法很多，常用的方法有： 化学滴定法 比色法 比旋光度法 紫外吸收法 电化学法 气体测定法 一般以测产物增加量为好，而且应测定反应初速度 2.酶的活力单位（U） 酶的活力的大小，也就是酶量的多少，用酶的活力单位来度量 1个酶活力单位，是指在25摄氏度、最适pH、适当的底物浓度等特定条件下，在1min内能转化1微摩尔（umol）底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关集团的酶量为一个国际单位 方便起见，如α-淀粉酶，可用每小时催化1克可溶性淀粉液化所需要的酶量来表示 新单位“Katal”简称Kat 一个“Kat”单位是指在一定条件下1s内转化1mol底物所需要的酶量 Kat与U的换算关系 1Kat=6〖×10〗^7U 1U=16.67nKat 3.酶的比活力 比活力是指每单位质量样品中的酶活力，即每毫克蛋白质中所含的酶活力单位（U）数或每千克蛋白质中含的Kat数。 在酶的提纯过程中，随着酶逐步被纯化，其比活力也在逐步增加，因此它也可用来比较酶制剂的纯度及评估纯化方法的效率。 比活力=活力U/mg=总活力U/总蛋白mg 4.酶的催化常数 催化常数（即转换数）为酶被底物完全饱和时，每单位时间内每一活性中心或每分子酶所能转换的底物分子数，表示一个酶的转换数，转换数也称为酶的分子活性 𝐾_𝑐𝑎𝑡/𝐾_𝑚 是底物与酶双分子反应的表现二级反应速度常数，是反映酶催化效率的指标。 𝐾_cat愈大，𝐾_𝑚愈小，酶的催化效率就愈高 谢谢大家！ 种科151班XS9红软基地