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这是一个关于硕士论文答辩范文PPT,主要介绍了相关研究背景、实验部分、结论、攻读学位期间发表的论文等内容。生物传感器由识别元件、信号转换器和信号处理器三部分构成,通过信号转换器将被测物与生物敏感膜特异性结合后所产生的生物的、化学的和物理的等信息转变成电信号、光信号、热信号等,从而达到分析检测被测物的目的。近些年来,生物传感器在医学诊断、食品营养、环境监测、国防工业及人类卫生保健等诸多领域得到了广泛的应用,尤其是在生物研究领域,如DNA检测、生物分子、蛋白质及细胞检测等,更是得到了快速的发展,欢迎点击下载硕士论文答辩范文PPT哦。
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主要内容提纲
相关研究背景
实验部分
结 论
攻读学位期间发表的论文
致 谢
一、相关研究背景
1. 生物传感器简介
2. 表面等离子共振生物传感器
3. DNA及酶的检测的意义
4.放大体系
5. 本课题的目的、意义及研究内容
1.生物传感器
生物传感器由识别元件、信号转换器和信号处理器三部分构成,通过信号转换器将被测物与生物敏感膜特异性结合后所产生的生物的、化学的和物理的等信息转变成电信号、光信号、热信号等,从而达到分析检测被测物的目的。
近些年来,生物传感器在医学诊断、食品营养、环境监测、国防工业及人类卫生保健等诸多领域得到了广泛的应用,尤其是在生物研究领域,如DNA检测、生物分子、蛋白质及细胞检测等,更是得到了快速的发展。
2.表面等离子共振生物传感器
表面等离子共振生物传感器的组成及原理
表面等离子共振生物传感器的优势
表面等离子共振生物传感器的应用
2.1.表面等离子共振生物传感器的组成及原理
结构:表面等离子共振传感器包括液体动力、进样、模式选择及样品检测四个部分
原理:偏振光在入射到蒸镀有金膜的棱镜端面,发生全反射,消逝波将激发自由电子,产生表面等离子共振波,当大部分消逝波的光能耦合到表面等离子波时,将会使棱镜中全反射光强迅速减少,这种情况下全反射的角度即为共振角。实验中预先将传感器芯片修饰上某种具有特异性的物质,流动样品与其特异结合,以电信号的形式将共振角变化反应出来。
2.2表面等离子共振生物传感器的优势
表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)生物传感技术是基于引起折射率变化的生物检测技术,这种微小的折射率变化与芯片上修饰的探针分子与靶物质的特异性结合成正向关联。与传统的生化分析方法相比,SPR的关键优势在于靶物质可以直接实时检测而不需要标记,同时具有灵敏度高、稳定快速、便捷实时,能够实现在线实时连续检测等适合生化分析的优点,其检测灵敏度较高,可以用于浓度介于皮摩尔到飞摩尔水平范围的微量物质检测。
2.3表面等离子共振生物传感器的应用
表面等离子共振生物传感器在薄膜光学、蛋白质组学以及检测分析分子之间的反应动态等领域均有较广泛成熟的应用,可以通过实时监测SPR共振角,进而对生物分子动态结合进行求证,同时也可以推断出被分析物的浓度、亲和力、反应动力学常数和特异性等信息[18]。商品化表面等离子共振仪已经发展成熟,并涉及到人类健康及生活水平的提高的多个领域均有广泛的应用[19-21]。
3.1凝血酶检测的意义
凝血酶是一种重要的丝氨酸蛋白酶,凝血过程中发挥着巨大作用,同时作为活性物质,不仅参与了人体血液正常生理活动,在抑制炎症和促进伤口愈合方面也有重要作用,研究凝血酶的浓度可以与很多常见病得发病机理相联系,因此对凝血酶进行微量准确快速的分析检测对人类的生命及健康具有重要的意义。
3.2 DNA检测的意义
DNA生命的密码,它编排了生命操纵着生命,作为细胞和病毒基因的载体的特定序列的DNA,为诊断疾病及研究病理作用方面,提供了特别重要的信息,并且在基因治疗、基因预防以及实施用药个体化的几个方面,都离不开DNA的检测,因此DNA的快速、高灵敏检测在分子生物学和临床诊断具有极其重要的意义。
4.1生物素-亲合素系统(biotin-avidin system,BAS)
生物素-亲合素系统(biotin-avidin system,BAS)是一种新型生物反应放大系统。具有高度亲和力及多级放大效应,特异性强,分子量大,亲和力强,稳定性好,这些性质使亲和素-生物素体系在SPR在线检测中得到较好的应用。
4.2滚环复制放大
滚环复制放大技术(RCA) 是一种基于DNA或RNA引物沿环状DNA等温滚动复制来实现核酸扩增的技术,这种技术具有相对无限单链扩增,不需要对模板进行特殊的变性,快速、特异、灵敏等优点,近年来,被广泛应用于基因检测、临床诊断方面的研究中。
5.本课题的目的、意义及研究内容
癌症作为人类健康三大杀手之一,有着很高的死亡率,对微量肿瘤标志物的准确灵敏检测,是早诊断早治疗的基础。检测凝血酶、核苷酸,对于癌症的早期诊断具有重要的意义。本论文主要结合了纳米技术、特异性结合原理、生物条码技术以及滚环复制放大手段等,对信号起到了放大的作用,被放大的信号,再通过表面等离子共振仪的检测进行转换,得到可以量化的数值,从而对微量的靶物质进行定性定量检测。
二、实验部分
基于纳米颗粒信号放大的SPR生物传感器的研究 (第二章)
基于滚环复制放大技术的SPR检测凝血酶的研究 (第三章)
基于酶循环放大的SPR检测DNA的研究
(第四章)
第二章 基于纳米颗粒信号放大的SPR生物传感器的研究
2.实验步骤
Au纳米粒子的制备
生物条码的制备
基底的修饰
生物素-亲和素特异反应
SPR生物传感器在线检测
3.结果与讨论
纳米金功能化磁珠制备的紫外检测图
3.结果与讨论
3.结果与讨论
生物条码的优化(两种DNA修饰的金纳米粒子(A),
一种DNA修饰的金纳米粒子(B), 单纯DNA互补杂交(C).)
3.结果与讨论
基底修饰方式的优化
3.结果与讨论
基底修饰方式的优化
3.结果与讨论
基底修饰方式的优化
3.结果与讨论基底修饰位置的优化
3.结果与讨论基底修饰位置的优化
3.结果与讨论进样流速模式的优化
SPR共振角度偏移与流速关系图: 20 μL/min(D)△ϴ = 0.48,50 μL/min(C)△ϴ = 0.5, 60μL/min出信号后调整为20 μL/min(A)△ϴ=0.58,80μL/min出信号后调整20μL/min(B)△ϴ=0.54
3.结果与讨论检测池温度优化
在实验过程中,温度也是一个重要的影响因素。在SPR生物传感器中,最常见的待测物质为生物分子的水溶液,其折射率受温度的影响与纯水类似,在同一波长下,随着温度的升高,水折射率逐渐减小,且温度越高,减小的幅度越大。所以对于对比试验,应设置相同的检测池温度,此外,本实验所使用的芬兰BioNavis公司生产的SPR Navi 200型表面等离子体共振生物传感器的可设置温度范围为低于室温5 ℃或高于室温15 ℃,但经过多次试验总结,温度过高或过低均易导致检测池漏气,影响检测效果,所以一般实验时温度设为高于室温2℃左右。
4.小结
本章设计了一种基于纳米金粒子质量放大SPR信号,对表面等离子共振仪生物传感器检测方式进行了探索,得到了较好的实验条件,并应用该实验条件,利用亲和素-生物素DNA为基底,通过生物条码进行信号放大,对靶DNA进行了检测,得到了较理想的SPR响应信号。
第三章基于滚环复制放大技术的SPR检测凝血酶的研究
Au纳米粒子的制备
生物条码的制备
基底的修饰
滚环复制扩增
放大体系的连接
SPR在线检测凝血酶
3.结果与讨论
实验的可行性检验
3.结果与讨论
反应温度的优化(C thrombin =1.0 × 10-13 mol/L)
3.结果与讨论
体系聚合反应时间的优化(C thrombin =1.0 × 10-13 mol/L)
3.结果与讨论
聚合酶浓度的优化
3.结果与讨论
纳米金粒径的优化
3.结果与讨论生物条码两种探针DNA比例的优化
3.结果与讨论选择性检测
3.结果与讨论SPR对于凝血酶的检测
3.结果与讨论SPR检测体系的实用性研究
4.小结
本章基于滚环复制放大技术,以及生物条码技术,对检测凝血酶的信号进行放大,利用凝血酶与其抗体及适体的特异性结合反应,使被放大的体系在SPR生物传感器的芯片上得到固定,实现了对凝血酶的微量检测,并且通过对反应温度、时间,聚合酶的浓度,以及生物条码进行了条件优化,得到了检测限为1 × 10-16 mol/L的实验结果,同时通过加标回收实验验证了此方法的实用性,赋予此方案较佳的临床应用性。
第四章 基于酶循环放大的SPR检测DNA的研究
生物条码的制备
基底的修饰MB-DNA的组装
S2的开环反应
表面等离子共振检测DNA
3.结果与讨论
可行性对比实验
3.结果与讨论
基底浓度的优化
3.结果与讨论
反应温度的优化
3.结果与讨论
聚合酶的用量的优化
3.结果与讨论
酶循环反应时间的优化
3.结果与讨论
选择性实验
3.结果与讨论
检测灵敏度
3.结果与讨论
检测灵敏度
4.小结
本章基于碱基互补配对、酶循环放大反应,结合磁性微球、生物条码技术进一步增大响应信号,提出了一种高灵敏度检测DNA的方法。靶DNA (S1) 将基底S2的环状结构打开,展开的末端序列与磁珠上的DNA互补配对,将磁珠链接到金基底上,通入的条码可以与磁珠上的另一条DNA链互补,经SPR检测技术间接放大了S1的信号,实现了对低浓度单链DNA高灵敏度的检测,并对检测条件进行了优化。这种检测方法为DNA的检测提供了一个更加简便快速的高灵敏度的途径,并为高灵敏度医疗诊断检测提供了参考。
三、结 论
第一部分对仪器及反应条件进行了探索,利用生物素-亲和素特异性结合进行DNA捕获探针的连接,根据DNA的互补杂交原理,通过纳米金生物条码对信号进行放大,实现对较低浓度靶DNA的检测,得到了明显的检测信号。
第二部分利用滚环复制技术对SPR响应信号进行离线预放大,得到了每段具有相同序列的长链DNA,最后将生物条码修饰的纳米金与滚环复制产物混合,对信号进行二次放大,实现了检测限为1×10-16 mol/L的高检测灵敏性,得到线性范围从1×10-16 mol/L到1×10-11 mol/L,线性方程为:Y = 0.5051 log10 C + 8.4928 R1=0.9926
第三部分是利用SPR生物传感器,基于酶循环来对信号进行放大,实现对DNA的微量检测。构建了酶循环反应,磁珠与生物条码构成放大体系。得到了明显而稳定的信号,最终检测限为7.8×10-15 M(3σ)。线性范围从1.0×10-14 mol/L至1×10-12 mol/L,线性回归方程为Y = 0.6844log10C + 9.7402(Y为SPR角度变化;C为靶DNA的浓度,R2 = 0.9854)。
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