双孢蘑菇原生质体ppt下载

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一、原生质体概念d5I红软基地
二、原生质体培养意义：d5I红软基地
第一节   原生质体的分离与纯化d5I红软基地
（四）分离方法d5I红软基地
二、原生质体的纯化d5I红软基地
第二节  原生质体培养d5I红软基地
二、培养方法d5I红软基地
2、平板法培养    原生质体（密度为4×105/ml）与等量体积琼脂糖培养基均匀混合—置于6cm培养皿（2-3mm），暗培养—5-7天原生质体开始分裂    特点：原生质体分布均匀，利于分裂，容易获得单胞株系，可定位观察。原生质体易受热伤害，易破碎，原生质体始终处于高渗透压胁迫下生长发育缓慢，植板率低。 d5I红软基地
3、悬滴法培养    将含一定密度原生质体的悬浮液，滴在6cm培养皿盖内侧上，皿底加入培养液和渗透剂等液体保湿，此时培养小滴悬挂在皿盖内。   特点：用材少，培养液消耗少，利于通风与观察，可做原生质体不同密度的培养对比试验，进行单细胞培养。d5I红软基地
4、双层培养法      固体培养和液体培养浅层培养相结合的方法，效果最佳。原生质体采用平板培养方法包埋在培养皿底层，上面再加入相同成分的液体培养基，暗培养。需更换新鲜液体培养基。      特点：原生质体分布均匀，有利于分裂，易获单细胞株系，能除去抑制分裂的有害物质，细胞植板率高。原生质体易受热伤害，易破碎。 d5I红软基地
5、饲喂培养法   将饲喂的细胞用培养基作平板，此平板称饲喂层，用X射线或紫外线照射，使核失活但细胞存活，然后将原生质体以液体浅层培养或平板技术铺在饲喂层上。   特点：以一种植物细胞制成的平板，支持另一种植物原生质体的生长。饲喂层没有种的特异性。d5I红软基地
三、原生质体存活率、密度及产量的测定d5I红软基地
（一）双醋酸盐荧光素染色法测定存活率   存活率=存活原生质体数/总原生质体数×100d5I红软基地
（二）测定原生质体的密度   原生质体的密度（个/ml）=（原生质体数/1区域）×104×稀释倍数d5I红软基地
（三）原生质体产量的测定                         Y=DV / FW      Y（个/g）——原生质体产量      D（个/ml）——存活原生质体密度      V（ml）——制备所得原生质体悬液的总体积      FW（g）——制备原生质体所用材料的鲜重d5I红软基地
四、影响原生质体培养的因素d5I红软基地
1、原生质体活力d5I红软基地
      选择生长健康植株上的外植体，或分裂旺盛的愈伤组织或悬浮细胞，在酶解处理时酶制剂浓度不要过高。d5I红软基地
2、原生质体起始密度d5I红软基地
      一般起始密度为5000-10000个/ml，看护培养可降低培养密度。d5I红软基地
3、渗透压稳定剂d5I红软基地
      在原生质体培养中除用2-3%蔗糖作为稳定剂外，还使用0.3-0.5mol/l的甘露醇。有的用葡萄糖完全或部分取代甘露醇，效果也很高。d5I红软基地
五、影响原生质体培养的因素d5I红软基地
4、培养基成分d5I红软基地
   1）基本培养基：MS，B5，Nitsch、N6、KM-8Pd5I红软基地
   2）碳源：葡萄糖（大多数用）d5I红软基地
   3）无机盐浓度和氮形态：无机盐浓度不宜过高，尤其铵态氮浓度不宜过高。d5I红软基地
   4）植物生长调节剂的浓度配比：d5I红软基地
5、培养条件d5I红软基地
   光照：原生质体培养初期不需要光照，采用暗培养，当形成细胞团后在光下培养，强光抑制细胞分裂d5I红软基地
   温度:26±1℃d5I红软基地
6、植物材料和基因型d5I红软基地
第三节 原生质体融合d5I红软基地
    也称体细胞杂交，就是分离下来的不同亲本杂交的原生质体，在人工控制下，像性细胞受精作用那样互相融合成一体。    自然条件下，原生质体自然融合频率极低，必须加以一定的方法诱导，才能促进原生质体的融合。d5I红软基地
二、原生质体融合的方法和过程（一）无机盐诱导融合      硝酸钠（二）聚乙二醇（PEG）诱导剂与高钙相结合的诱导融合   1、PEG诱导剂溶液配制：分子量为4000-6000。    2、高Ca2+-高PH液   3、原生质体培养基：NT与MSd5I红软基地

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